ELECTROFORESIS DE HEMOGLOBINAS
Para detectar qué tipos de hemoglobina hay en sangre, y así detectar las posibles anemias o
tipos de anemias.
Material:
-Tiras de cellogel
-Aplicador de
electroforesis semicírculo
-Rodillo
-Bandeja
-Cubetas de plástico
-Fuente de alimentación
-Placa de vidrio
-Centrifugadora
-Pipeta de 5ml
-Pipeta de 5ml
Reactivos:
-Agua destilada
-Suero fisiológico
-Ácido acético
5%(solución decolorante)
-Metanol,ciclohexanona,
ac.acético glacial (solución transparentadora)
-Cloroformo
-Metanol
-Tampón ph 8.8
-Negro amido (colorante)
Técnica:
-PRIMERA PARTE DE LA
TÉCNICA
-Preparación de
hemolizado:
1. Preparamos 3ml de
sangre.
2. Lo centrifugamos a
3000 rpm unos 10 minutos.
3. Retiramos el
sobrenadante con una pipeta pasteur de cristal y le echamos 4-5 ml de suero
salino.
4. Homogeneizamos bien
con pipeta pasteur que hemos comprobado que da mejor resultado que con un
agitador magnético.
5.
Lo introducimos de nuevo a la centrifugadora
5 min (en clase hemos centrifugado 10 minutos porque con 5 se quedaba el
proceso sin terminar).
6. Volvemos a repetir este paso de lavado unas 3 veces consecutivas.
Se repite la operación
pero esta vez lo hemolizamos con cloroformo y agua destilada (medimos el
volumen de hematíes y se le añade media parte de cloroformo que lo introducimos
en la cámara de seguridad y parte y media de agua destilada.
Ejemplo: si de
hematíes hay un volumen de 1ml,hechamos 0,5 de cloroformo y 1,5 ml de agua
destilada.
-2ª PARTE DE LA
TÉCNICA:
1 Introducimos tiras
cellogel en cubeta boca arriba en tampón durante 10 min que se empapen bien.
2 Colocamos las tiras en
el puente, lo introducimos en cubeta y colocamos nuestra muestra en la tira haciendo
una fina raya de sangre. Le aplicamos la fuente de alimentación a 400v durante
15 min. (porque con 10min no nos a salido bien).
-bandeja con ácido. acético 5% 10 min(decoloración)se repite 3 veces.
-bandeja con metanol 1 min (deshidratación)
-bandeja con solución transparentadora 2-3 min (transparentación).
-bandeja con metanol 1 min (deshidratación)
-bandeja con solución transparentadora 2-3 min (transparentación).
4 Después se colocan las tiras en una placa de vidrio y las alisamos con un rodillo, con la parte absorbente boca abajo.
5 Metemos en la estufa unos 60-70ºC unos 5-6 min hasta que las tiras queden transparentes del todo.
Resultados:
6 -Hemoglobina A.
