PRUEBA DE MEZCLA CON PLASMA NORMAL Práctica XLV del libro, pag 362, 10-03-2015

PRUEBA DE MEZCLA CON PLASMA NORMAL

FUNDAMENTO:

Se dertemina cuando el TP normal y un TTPA alargado, en esta circunstancia se supone , que el paciente sufre un deficit de algun factor de la via intrinseca y en concreto , de los factores VIII , IX o XII

• Si el TTPA determinado en la mezcla se corrige falta , en el plasma problema, algunno de los factores de la via intrinseca que , sin embargo , si esta presente el el PPP normal
• Si el TTPA de la mezcla no se corrige con respecto al del PPP problema puro , el trastorno coagulatorio se debe a otros motivos  

MATERIAL:

• Micropipeta
• Tubo de plastico
• Baño María
• Coagulometro
• Cubetas de coagulometro
• Trozo de metal
• Vaso de precipitado
• Puntas de micropipeta

REACTIVOS:

• Cloruro calcico 0.025M
• Cefalina activada
• Pool de plasma control normal

MUESTRA:

Plasma pobre en plaquetas (55 ul)

Plasma control normal (55ul)

DESARROLLO:

PROCESO 1

1. Cogemos un tubo de plástico y le ponemos 55 ul de ppp con la ayuda de una micropipeta de 10-100ul y 55 ul de serican anormal

2. Lo introducimos en el Baño María durante 15 minutos a 37 grados centígrados

3. Cuando lo sacamos del baño Maria , ponemos una cubeta en el coagulometro y añadimos 100 ul

4. Añadimos un trozo de acero y lo dejamos 2 minutos en el coagulometro

5.Ponemos 100 ul de cefalina activada

6. Cuando queden 20 segundos se saca la cubeta y la introducimos debajo del tapón rojo, lo tapamos y introducimos 100 ul de cloruro calcico

PROCESO 2

1.Igual que el proceso número uno , pero solo se diferencia que este se hace solo con el Baño Maria , lo cual tenemos que dejarlo durante 5 minutos , y trascurrido ese tiempo ir sacando cada 10 segundos para ver cuanto tiempo tarda en coagular.

RESULTADO:

LECTURA DE LOS RESULTADOS

El TTPA es le tiempo transcurrido desde la adición del CaCl2 hasta la formación del coagulo de fibrina

Los valores normales del TTPA están comprendidos entre 30 y 40 segundos.

INTERPRETACIÓN CLÍNICA DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS

• Si el TP es normal y el TTPA esta alargado , el enfermo . probablemente , padecerá un trastorno de la vía intrínseca. En este caso se debera repetir la determinacion del TTPA, pero incubando la mezcla con plasma y cefalina activada durante 15 minutos 
• Si tras la mezcla con plasma normal , el TTPA no se corrige , es decir, deja de estar alargado , falta algun factor de la via intrinseca
• Si por lo contrario , tras la mezcla con plasma normal , no se corrige el TTPA , se debe investigar la presencia en el plasma de un inhibidor de la coagulacion

HOJA DE TRABAJO

1.    ¿Cuando debe hacerse una prueba de mezcla con plasma normal?

Cuando el plasma problema se determina un TP normal y un TTPA alargado

2.    Si tras la mezcla con plasma normal, no se corrige el TTPA, ¿Qué se debe investigar?

La presencia en el plasma de un inhibidor de la coagulación.

RESULTADOS OBTENIDOS

Tras la mezcla del plasma problema anómalo con plasma normal:

No se ha corregido el TTPA

VALORACIÓN DE LOS RESULTADOS

La prueba realizada indica:

observaciones

En el baño Maria ha durado 60 segundos y en el coagulometro lo hemos hecho dos veces y la primera nos ha quedado bastante corta y la otra normal.

DETERMINACIÓN FUNCIONAL DEL FIBRINÓGENO Practica XLII del libro, pag 353, 09-03-2015

DETERMINACIÓN FUNCIONAL DEL FIBRINÓGENO

Fundamento 

Realizar una determinación cronométrica de fibrinógeno, según el método de von Clauss (se basa en la medición del tiempo que tarda un exceso de trombina en degradar a fibrina el fibrinógeno presente en un PPP diluido y, por tanto, en forma de coágulo).

Material

Gradilla, tubos de ensayo de plástico, micropipeta, puntas de micropipetas, rotulador de vidrio, cubetas de coagulómetro, trocitos de acero para las cubetas, coagulómetro, bolígrafo, hoja milimetrada.

Reactivos: 

• R1 (trombina bovina)
• R2 (tampón imidazol)
• R3 (solución caolín)
• Coagulation cal

Muestra: 

• PPP (plasma pobre en plaquetas) 

Desarrollo: 
-Preparamos una dilución 1/10 de la muestra y los controles en Tampón Imidazol (0'05 ml de muestra + 0'45 ml de tampón imidazol).
-Preparamos las diluciones del calibrador en tampón imidazol:

-Colocamos 5 trocitos de acero en las cubetas del coagulómetro, perfectamente rotuladas, y le añadimos 0'2 ml de cada dilución y de la muestra, cada uno respectivamente en su cubeta rotulada.

-Añadimpos 0'02 de R3 en cada cubetas y lo atemperamos, en la placa calefactora entre 4 y 6 minutos.

-Vamos introduciendo, consecutivamente, cada una de las cubetas en la celda de medida del coagulómetro y le añadimos 0'1 ml de R1 (sin atemperar).

-Antomos0 los tiempos y realizamos una curva de actividad con las diluciones del calibrador y luego colocamos la muestra.

Resultados: 

Interpretación de los resultados

 Los valores normales de la fibrinogenemia oscila entre los 150 mg/dl y los 450 mg/dl. Nuestra muestra está por debajo de esos valores normales (más o menos 58) , que puede deberse a trastornos congénitos a  ( fibrinogemia congénita) o adquiridos (hepatopatías).

Hoja de trabajo:

1.   ¿De qué tipo es la determinación de fibrinógeno realizada en esta práctica?

Es una determinación funcional de fibrinógeno.

2.   ¿A qué concentración esta la trombina bovina? 

Está a una concentración de 100 U NIH/ml.

3.   ¿A qué dilución se somete a la muestra? 

La muestra se somete a una dilución de 1/10.

4.   ¿Cuál es la fibrinogenemia normal? 

La fribinogenemia normal oscila entre los 150 y los 450 g/dl.

PREPARACIÓN DE UNA CURVA DE ACTIVIDAD DE LA PROTROMBINA Práctica XL del libro, 6-03-2015

PREPARACIÓN DE UNA CURVA DE ACTIVIDAD DE LA PROTROMBINA.

Fundamento.
Debemos realizar una bateria de diluciones,para obtener con el coagulometro el TP del plasma puro y de cada una de sus diluciones para realizar la curva.

Material.

• 8 tubos de ensayo de plástico.
• Rotulador de vidrio.
• Una pipeta graduada de vidrio de 1 ml.
• Una micripipeta de 100 y 200 microlitros.
• 7 puntas de micropipeta.
• 5 cubetas de coagulómetro.
• 5 trocitos de acero especiales para depositar en el interior de las cubetas.
• Un coagulómetro.
• Una gradilla.

Reactivos.

• Solución salina al 90 %.
• Una tromboplastina cálcica.
• Un pool de plasma normales.

Procedimiento.

Lo primero que hicimos en el pool de plasma, tomamos plasma congelado de otros años los atemperamos a 37º y los añadimos todos en un vaso de precipitados, y por último lo añadimos en los tubos de spenderfor.

Después tomamos 5 tubos de ensayo de plástico y los rotulamos con el porcentaje de actividad asignado a cada dilución que serían un tubo rotulado con 100 , otro con el de  50, otro con el de  33, otro con  25 y el último con el de 10 %.

Al tubo rotulado con % de actividad 100 le añadimos con una micropipeta 200 microlitros de pool de plasma; al tubo 50 le añadimos 200 microlitros de pool de plasma y 200 microlitros de solución salina al 0,85 %; al tubo 33 le añadimos 200 microlitros de pool de plasma y 400 microlitros de solución salina al 0,85%; al tubo 25 le añadimos 200 microlitros de pool de plasma y 600 microlitros de solución salina al 0,85%; al tubo 10 le añadimos 200 micrilitros de pool de plasma y con una pipeta graduada de vidrio le añadimos 1,8 ml de solución salina al 0,85%.

Cuando ya tenemos los 5 tubos con pool de plasma y solución salina, con una micropipeta vertemos 100 microlitros de plasma puro y de cada una de sus diluciones en las cubetas rotuladas con el %de actividad que le corresponde. A cada una de las 5 cubetas le añadimos un trocito de acero.

Estas cinco cubetas las colocamos en la celdas que hay en el coagulómetro y en otra cubeta añadimos tromboplastina cálcica. En el coagulómetro le tenemos que añadir a cada cunbeta 200 microlitros de tromboplastina calcica.

Hoja de trabajo:

.

1º. ¿Con qué se diluye el pool de plasmas normales o el plasma control normal?

Con solución salina al 0,85 %

2º. ¿Qué porcentaje de actividad se asigna a la dilución del plasma control de 1/2?

 50 % de actividad.

3º. ¿ Cuándo se pone en marcha la lectura del coagulómetro?

Añadiendo a las diluciones 200 microlitros de tromboplastina cálcica.

4º. ¿Qué se anota en el eje de ordenadas?

Los valores en segundos del TP del plasma control no diluido y de cada una de sus diluciones.

Resultado obtenido.

	Tiempo de Protrombina (PT)
Plasma control no diluido (de 100% deACTIVIDAD)	12 segundos
Plasma control diluido a 1/2 (de 50% de actividad)	19 segundos.
Plasma control diluido a 1/3 (de 33% de actividad)	25,3 segundos.
Plasma control diluido a 1/4 (de 25% de actividad)	32,4 segundos.
Plasma control diluido a 1/10 (de 10% de actividad)	65,1 segundos.

TIEMPO DE TROMBOPLASTINA (TP) Práctica XLI pag 350 del libro

Tiempo de protrombina (TP) (05-03-15)

FUNDAMENTO

El tiempo de protrombina (PT), es el tiempo que tarda en coagular un PPP cuando se pone en contacto con un exceso de calcio y de tromboplastina hística.

El reactivo utilizado, para la realización de esta prueba, es una mezcla de tromboplastina hística (TH) y de calcio, por lo que recibe el nombre de tromboplastina cálcica.

La TH procede de extractos de cerebro o de pulmón, de hombre o de animales (generalmente, de conejo o de vaca).

  MUESTRA.

Plasma pobre en plaquetas (PPP), correctamente preparado.

 MATERIAL UTILIZADO.

MATERIAL

     - Tubo de ensayo de plástico.

- Gradilla.

- Cubetas de coagulómetro.

- Varilla para coagulómetro.

- Rotulador de vidrio.

- Pipeta automática de 100 µl y 200 µl.

- Coagulómetro.

- Papel  de fieltro.

REACTIVOS

• Una tromboplastina cálcica.

La sensibilidad de todas las TH comerciales se compara con una TH de referencia internacional y se expresa en forma de un índice de Sensibilidad Internacional (ISI). Cuanto menor es el ISI de la TH comercial, mayor es su sensibilidad.

El ISI de cada reactivo de tromboplastina cálcica comercial puede ser diferente y, además, puede variar de un lote a otro. Por lo que debe de mirarse en el folleto de instrucciones que se adjunta en el envase.

REACTIVOS R	Tromboplastina calcica liofilizada, extracto de acetona dehidratada de cerebro de conejo y CaCl2. Tampón y conservantes.
Opcional	CONTROL NORMAL REF: 1709104 CONTROL PATHOLOGIC REF: 1709106

SECUENCIACIÓN Y PROCEDIMIENTO SEGUIDO (TÉCNICA).

1.      Reconstituir los reactivos.

a.       Ref. 1709222-1709224-1709225 Reactivo de trabajo (RT): Reconstituir el contenido de un vial R con 4,0 ml de agua destilada.

b.      Ref. 1709223. Reactivo de trabajo (RT): Reconstituir el contenido de un vial R con 2,0 ml de agua destilada.

c.    Tapar el vial y mezclar suavemente hasta disolver su contenido. Evitar la formación de espuma. Incubar 15 min. a temperatura ambiente, antes de su uso.

2.       Depositar el volumen total de la tromboplastina cálcica, que es necesaria, en un tubo de ensayo rotulado correctamente.

3.      Atemperar la tromboplastina cálcica a 37º C durante 5 minutos.

4.      Rotular las cubetas con las letras M y C.

5.      Verter 100 µl de PPP problema en el interior de la cubeta y atemperar a 37º C.

6.      Colocar la cubeta en la celda de medida del coagulómetro y agregar 200 µl de tromboplastina cálcica.

7.      Automáticamente, se pone en marcha el magnetoagitador del coagulómetro y comienza la lectura de éste.

Cuando se forma el coágulo, el coagulómetro finaliza la lectura y nos ofrece en su pantalla el tiempo transcurrido desde la adición de la tromboplastina cálcica.

 DESCRIPCIÓN Y REGISTRO DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS CON EVALUACIÓN PERSONAL DEL ALUMNO DE LOS MISMO RESULTADOS.

El TP es el tiempo transcurrido desde la adición de la tromboplastina cálcica hasta la formación del coágulo de fibrina.

El resultado también puede expresarse en forma de porcentaje de actividad de la protrombina. Para ello, el valor en segundos del TP determinado en la muestra se interpola en la curva de actividad de la protrombina, previamente preparada, y se halla el porcentaje de actividad de la protrombina que le corresponde a éste.

Además, el resultado puede expresarse en forma de cociente o proporción (ratio) entre el valor, en segundos, del TP de la muestra y el de un plasma control no diluido ( el de 100% de actividad)

Este cociente puede ser corregido con el ISI de la tromboplastina hística, en este caso se denomina INR y se calcula con la siguiente fórmula:

Los valores de TP están comprendidos, normalmente, entre 11 y los 15 segundos.

El porcentaje de actividad de la protrombina de un plasma normal oscila, habitualmente, entre el 70 y el 100%.

La ratio de protrombina normal está comprendida entre 0,9 y 1,15.

El tiempo de protrombina está alargado, el porcentaje de actividad de la protrombina está disminuido y la ratio de protrombina está aumentada, en pacientes:

·         Con déficits de factores de la vía intrínseca.
·         Sometidos a terapias con dicumarinas.
·         Con algún trastorno hepático.

Los valores que se han obtenido con la práctica son:

	Segundos	Porcentaje	Ratio	I
Muestra	24,9 sg	33,2 %	2,02	2,31
Control	16,8 sg	59 %	1,37	1,45

Este resultado lo interpolamos a la tabla y nos da un valor de un porcentaje al 50 % y 19 seg, por lo que el resultado, según los valores normales, está alargado, por lo que la muestra puede pertenecer a algún paciente con alguna de las patologías antes descritas.

 OBSERVACIONES, COMENTARIOS Y CONCLUSIONES.

Los factores extrínsecos de la coagulación se activan en presencia de tromboplastina cálcica en plasma citratado. El proceso de medición del tiempo de protrombina en una etapa única, mide el tiempo de coagulación del plasma después de la adición del reactivo.

El Tiempo de Protrombina (PT) o Tiempo de Quick sirve para determinar trastornos de la coagulación, la PT es la determinación más frecuente junto con la APTT.

La PT es sensible a las anomalías de los factores extrínsecos de la coagulación (Factor II, V, VII, X y fibrinógeno), así como sus inhibidores. Es, además, un indicador de enfermedades hepáticas.

La muestra ensayada tiene un tp normal.

Hoja de trabajo

1º ¿Qué índice expresa la sensibilidad de una tromboplastina hística?

Se expresa con el ISI (Índice de Sensibilidad Internacional). Cuanto menor es el ISI de la TH comercial, más sensible es.

2º ¿Cómo se llama la ratio de protrombina corregida?

Se llama INR.

3º ¿Cuál es el % normal de actividad de protrombina?

El % normal de actividad de protrombina está entre el 70 y 100%

4º. ¿En qué circunstancias se altera el TP?

Se altera en pacientes:

·         Con déficits de factores de la vía intrínseca.

·         Sometidos a terapias con dicumarinas.

·         Con algún trastorno hepático.

PRUEBA DE RUMPEL-LEEDE Práctica XXXVI del libro, pag 331, 05-03-2015

PRUEBA DE RUMPEL-LEEDE.

Fundamento.
Esta práctica ofrece información sobre la fragilidad capilar.

Material.

• Un rotulador.
• Un esfigmomanómetro,
• Un fonendoscopio.
• Un reloj.

Procedimiento.

1. Lo primero que hay que hacer es medir la presión arterial.
2. Trazamos un circulo de unos 5 cm de diámetro en la cara anterior del antebrazo.
3. Colocar el esfigmomanómetro en el brazo donde se ha pintado el circulo.
4. Insuflar aire del maguito del  esfigmomanómetro hasta ejercer una presión equivalente a la presión arterial media de la persona que esta realizando la prueba.
5. Mantenerlo durante 5 minutos.
6. Aflojar y retirar el esfigmomanómetro.
7. Contar la petequias que hayan aparecido en el interior del circulo.

Resultado.

Resultado de la presión arterial es de:

Presión sistólica : 10

Presión diastolica: 6

La media es 8.

No se ha observado ninguna petequia.

Hoja de trabajo.

1º, ¿Cuánto tiempo se deja puesto el esfigmomanómetro en esta prueba ?

Durante 5 minutos.

2º. ¿Cómo se aprecian las petequias?

Como pequeñas manchas cutáneas de color rojizo.

3º. ¿Cuántas petequias debe contener el círculo para que el resultado sea claramente positivo?

Si hay mas de 20 de petequias.

4º. ¿En qué enfermedades hay una prueba de Rumpel-Leede positiva ?

En las trombocitopenias, en la enfermedad de von Willebrand, en el escorbuto y, sobre todo, en las púrpuras vasculares.

Resultado obtenidos.

El número de petequias aparecidas dentro del círculo es :

Menor de 10.

¿Han aparecido petequias fuera de la cara anterior del antebrazo? : No

¿Tienden a confluir la petequias ? No

Valoración de los resultados.

El resultado de la prueba es : Negativo.

¿Tiene el paciente una fragilidad capilar aumentada? No.