Determinación rápida de hemoglobina

Fundamento

Esta determinación rápida de HB se basa en el hecho de que una sangre una concentración HB superior a la permitida para poder efectuar una relación tiene una densidad mayor a la de la solución de sulfato de cobre previamente preparada por lo que en esta circunstancia una gota de la sangre investigada que libremente a través de la solución de sulfato de cobre

Material necesario

• Material de extracción de sangre capilar
• Un vaso de precipitado de 50 mililitros

Reactivos

1º Solución de sulfato de cobre a una densidad de 1, 052 gr/dl  para mujeres y 1,054 para hombres gr/dl.

Para ello lo hacemos de la siguiente forma primero y sobre 17 gramos de sulfato de cobre en 100 mililitros de agua destilada solución madre.

2º Mezclar 51 ml de la solución madre con 49 ml de agua destilada.

Muestra

• sangre capilar

Técnica

1.  Disponer la solución de sulfato de cobre en un vaso de precipitado de 50 mililitros
2.  Recoger una gota de la sangre problema
3. Dejar caer la gota de la sangre problema con algo de impulso sobre la solución de sulfato de cobre

Lectura de resultados

Si la gota de sangre problema es más densa que la solución de sulfato de cobre que libremente a través de ella.

Sin embargo si la gota de sangre problema es menos densa que la solución de sulfato de cobre no caer al fondo del vaso de precipitados que contiene esta solución.

Interpretación de los resultados

Una gota de sangre con más de 12 gr/dl de HB tiene una densidad mayor que 1, 052 gramos/cm3.

Si la gota de sangre problema cae libremente a través de la solución de sulfato de cobre tiene una densidad mayor que 1,52 gramos por centímetro cúbico y por lo tanto tiene una concentración de HB superior a 12 gramos por decilitro.

Si la sangre problema tiene una concentración de HB superior a 12 gramos por decilitro el sujeto puede donar sangre.

En el caso contrario la donación no puede ser efectuada.

Hoja de trabajo

1¿Cuál es el valor mínimo de hemoglobina que debe tener una mujer antes de la donación?  12,5 g/dl en mujeres.
2. ¿Con qué otra solución comparamos la densidad de la sangre? Con solución de sulfato de cobre.

DETERMINACIÓN DEL FENOTIPO Y GENOTIPO DEL SISTEMA Rh, Práctica LXI del libro, pag 578, 07-05-2015

DETERMINACIÓN DEL FENOTIPO Y GENOTIPO DEL SISTEMA  Rh

Fundamento

  Determinar el fenotipo del sistema Rh enfrentando los hematíes problema con los sueros anti-D, anti-C, anti-E, anti-e y anti-c, y con el fenotipo buscar el genotipo más probable.

Material

  Tubos de centrífuga, centrífuga, rotulador de vidrio, pipetas pasteur, gradilla, visualizador luminoso

Reactivos

• Sueros anti-D
• Suero anti-C 
• Suero anti-E 
• Suero anti-c
• Suero anti-e
• Suero salino

Muestra

• Suspensión de hematíes al 5% (véase práctica LX )

Técnica

1. Rotulamos cinco tubos de centrífuga, cada uno con la letra D, C, E, c y e.
2. Añadimos una gota de suspensión de hematíes a cada tubo y una gota del suero correspondiente.
3. Centrifugamos todos los tubos a 1.000 rpm durante 1 minuto
4. Observamos si existe aglutinación o no con e visualizador luminoso

Observaciones

Para observar si existe aglutinación o no, golpeamos suavemente con los dedos en el fondo del tubo par despegar el botón hemático, si existe algutinación se observará grumos de color rojo.

Resultados

Interpretación de los resultados 

En fenotipo obtenido es el siguiente:

Tubo	Aglutinación
D	+
C	-
E	+
c	+
e	+

El/ los posible/s genotipo/s se puede/n obtener mediante esta tabla:

Por lo tanto, los posibles genotipos de la sangre problema son: 

DcE/dce,     DcE/Dce,    Dcee/dcE
Hoja de trabajo:

1. ¿Qué antisueros se utilizan en esta técnica? Los antisueros anti-D, anti-C, anti-E, anti-c y anti-e 
2. ¿Por qué no existe suero anti-d? Porque no existe el antígeno d ni el anticuerpo anti-d
3. ¿Qué expresan los cinco resultados obtenidos? Expresan el fenotipo de la sangre analizada
4. Si la sangre es Rh+, ¿puede determinarse exactamente su genotipo con respecto al sistema Rh? Exactamente no se podría ya que no se puede saber si es Rh + heterozigotico o homozigotico.
5. Si los resultados obtenidos son: D-, C-, E+, c+ y e-; ¿Cuál es el genotipo posible de esta sangre? El genotipo será dcE/dcE.

DETERMINACIÓN DEL GRUPO Rh EN TUBO Práctica LX del libro, pag 575, 05/05/2015

DETERMINACIÓN DEL GRUPO Rh EN TUBO

Fundamento

 Determinar el grupo Rh de la muestra enfrentándolo al suero anti-D

Material 

Tubos de centrífuga, pipetas pasteur, centrífuga, rotulador de vidrio, gradilla, vasos de precipitado,visualizador luminoso

Reactivos 

• Suero anti-D
• Albúmina bovina al 30% 
• Suero fisiológico

Muestra

• Sangre venosa anticoagulada

Técnica

-Debemos obtener una suspensión de hematíes al 5% de la sangre problema de la siguiente manera:

Añadimos 0'5 ml de la sangre problema en un tubo de centrífuga y lo rellenamos con suero fisiológico.
Lo metemos en la centrífuga, y centrifugamos a 2.000rpm durante 4 minutos.
Extraemos el sobrenadante y repetimos la operación dos veces más.
Después de los tres lavados

-Añadiremos 250 microlitros de hematíes lavados en un tubo con 475 ml de suero salino y homogenizamos.--Rotulamos dos tubos limpios con las letras D y A
-En el tubo D añadimos una gota de suero anti-D y en el tubo A una gota de albúmina bovina al 30%
-A cada tubo le añadimos una gota de la suspensión de hematíes al 5% y agitamos suavemente para mezclar el contenido de los tubos.
-Centrifugamos los tubos a 1.000 rpm durante un 1 minuto.
-Después de la centrifugación observamos si ha habido aglutinación en el visualizador luminoso.

Observaciones

El tubo con albúmina es un control negativo, por lo que si resulta una aglutinación el resultado de la prueba no es válido. Para ver si hay aglutinación o no, se debe golpear suavemente el fondo de los tubos para despegar el botón hemático, si se resuspende es negativo y si se forman grumos de color rojo es positivo.

Resultados:

Interpretación de los resultados 

Los dos tubos se han resuspendido por lo tanto el Rh de la muestra es negativo.

Hoja de trabajo

1. ¿Por qué utilizamos el control de albúmina? Porque el control de albúmina es negativo y así evitamos los falsos positivo.
2. ¿Qué ocurre si no aparece aglutinación en el tubo D? El Rh de la sangre problema es negativo.
3. ¿Qué debemos detectar mediante un Coombs indirecto? Debemos comprobar que el paciente no posee un Du (D débil).
4. ¿Cómo se prepara la muestra problema? Lavando los hematíes de la muestra problema y haciendo una suspensión de hematíes al 5%.

DETERMINACIÓN DEL GRUPO Rh PORTA Práctica LIX del libro, pag 573, 05/05/2015

DETERMINACIÓN DEL GRUPO Rh PORTA 

Fundamento 

Determinar el grupo Rh, enfrentando la sangre problema al suero anti-D

Material 

•  Portaobjetos,
•  Palillos agitadores
•  Rotulador de vidrio
•  Lancetas
•  Gasas
•  Visualizador luminoso

Reactivos

• Alcohol, 
• Suero anti-D 
• Albúmina bovina al 30%

Muestra

• Sangre capilar

Técnica  -Dividimos el portaobjetos en dos secciones con el rotulador de vidrio y marcar una con la letra S (de suero) y otro con la letra A (de albúmina).
-Con la lanceta nos pinchamos un dedo, y en cada sección añadimos una gota de sangre.
-Añadimos una gota de suero anti-D en la sección S y una gota de albúmina, en la sección A.
-Con los palillos mezclamos la sangre con el suero y la albúmina.
-Colocamos el porta en un visualizador luminoso y lo agitamos un poco para observarlo.
Observaciones: La aglutinación se favorece con el calor, por lo que es imprescindible colocarlo en el visualizador luminoso para observar si hay aglutinación (aparición de grumos rojos sobre un fondo claro).

Resultados

Interpretación de los resultados 

En la sección S, se puede observar que existe aglutinación, por lo tanto el grupo Rh es positivo.
Hoja de trabajo

1. ¿Qué tipo de muestra empleamos en esta técnica? Utilizamos sangre capilar
2. ¿Para que se utiliza el visualizador? Para observar la aglutinación (si hay) ya que el calor favorece la aglutinación.
3. ¿Qué puede dar lugar a falsas aglutinaciones? Pequeños coágulos de fibrina contenidos en la muestra.
4. ¿Qué ocurre si aglutina la sección A? No se puede informar de los resultados, ya que esta sección debe ser negativa.

DETERMINACIÓN SÉRICA DEL GRUPO ABO Práctica LVII del libro, pag 561

DETERMINACIÓN SÉRICA DEL GRUPO ABO

FUNDAMENTO:

El suero de un individuo solo debe contener anticuerpos frente a los antígenos que no están presentes en sus propios hematíes.Por ello,al hacer reaccionar este suero con hematíes conocidos del grupo A y del grupo B,solo producirá aglutinación en el caso de ser enfrentado a eritrocitos con antígenos distintos a los de sus propios hematíes.

Esta técnica puede realizarse tanto en porta como en tubo,aunque se prefiere la determinación en tubo porque la centrifugacion de los hematíes intensifica el fenómeno de aglutinación

MATERIAL:

• Tubo de centrifuga
• Pipeta pasteur
• Baño maría
• Centrifuga
• Reloj
• Rotulador
• Papel de fieltro
• Gradilla
• Guantes
• Micropipeta
• Puntas de micropipeta
• Vaso de precipitado 
• Vaso de precipitado para residuos
• Para film

REACTIVOS:

• Hematíes del grupo A1
• Hematíes del grupo A2
• Hematíes del grupo B
• Hematíes del grupo 0
• Hematíes de la sangre problema

MUESTRA:

Suero

DESARROLLO:

1. Cogemos un 1 ml de sangre con una micropipeta y echamos una cantidad de suero salino
2. Centrifugamos los tubos a 2.000 rpm durante 4 minutos
3. Retiramos el sobrenadante
4. Repetimos dos veces mas el proceso anterior
5. Añadimos en otros 4 tubos dos gotas de sangre de cada grupo y 5 ml de suero fisiológico
6. Rotulamos un tubo de centrifuga con la letra A1; A2;B;0
7. Añadimos a cada tubo dos gotas de suero problema
8. Depositamos una gota de la suspensión de hematíes que se corresponderá con la letra del tubo rotulado.
9. Agitamos suavemente y centrifugamos a 1000 rpm durante 1 minuto
10. Golpeamos suavemente el extremo inferior de los tubos 

RESULTADO:

LECTURA DE LOS RESULTADOS

• Si aparecen unos grumos rojos flotando en un liquido claro indica que existe aglutinación.
• En el caso contrario, los hematíes se resuspenden homogéneamente dando lugar a un liquido de color rojizo

INTERPRETACIÓN CLÍNICA DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS

El grupo eritrocitario que se asignara,atendiendo a los resultados obtenidos,se puede ver en el siguiente cuadro:

Tubo A1	Tubo A2	Tubo B	Tubo 0	Tubo C	ac presentes en el suero	Grupo eritrocitario
-	-	+	-	-	Anti-B	A1
- o +*	-	+	-	-	Anti –B y anti-A	A2
+	+	-	-	-	Anti-A	B
+	+	+	-	-	Anti-A y anti-B	0
-	-	-	-	-	Ninguno	A1B
-o+”	-	-	-	-	Niguno o anti-A1	A2B
+	+	+	+	+	Autoanticuerpos	Initerpretable

+ = Aglutinación

- = No aglutinación

* = Este anti-A1 se encuentra solo en un 2% de los individuos A2

0 = Este resultado se observa solo en el 25% de los individuos A2B

ES difícil confirmar el grupo sanguíneo por esta técnica en el caso los recién nacidos ,ya que sus anticuerpos no están bien desarrollados aun.También encontramos dificultades en los pacientes con agammaglobulinemia,ya que carecen de anticuerpos y en aquellos que poseen otros anticuerpos específicos o inespecificos capaces de reaccionar con los antígenos del grupo ABO

HOJA DE TRABAJO:

1.¿Que son los hematíes tipados?

Los que sabemos de que tipo son.

2.¿A que dilucion empleamos los hematíes del paciente?

5%.

3.¿Que clase de muestra se emplea en esta técnica?

Suero.

4.¿Que ocurre cuando el tubo C presenta aglutinación?

Que hemos cometido algún error.

RESULTADOS OBTENIDOS:

	Aglutinación	No aglutinación
Tubo A1	NO	NO
Tubo A2	NO	NO
Tubo B	NO	NO
Tubo 0	NO	NO
Tubo C	NO	NO

VALORACIÓN DE LOS RESULTADOS:

• Los AC encontrados en el suero son: Nada
• El grupo eritrocitario de la sangre amalizada es: Nada

OBSERVACIONES:

Nos han salido las dos veces negativas , la primera la hemos echo con los hematíes de suspensión de 2.5% , con dos gotas de suero y la segunda vez la hemos echo con 6 gotas de hematíes y 2 de suero y tampoco ha salido aglutinación