PRUEBA DE LA SACAROSA
Consiste en situar los hematíes problema en un medio de baja fuerza ioniaca.En este medio los eritrocitos tienden a fijar el complemento , por lo que cuando los glóbulos rojos presentes en la muestra tienen una sensibilidad anormalmente alta al complemento tienden a sufrir la acción de este y por tanto a lisarse.
MATERIALES:
- Pipeta pasteur
- Pipeta graduada
- Pipeta automatica
- Tubo de centrifuga
- Centrifuga
- Espetrofotometro
- Gradilla
- Rotulador
- Puntas de pipeta
- Papel de fieltro
- Cubetas de espetrofotometro
REACTIVOS:
- Solución acuosa de sacarosa 9.24%
- Solución acuosa de amoniaco 0.04%
- Suero fisiológico 0.9%
MUESTRA:
Sangre venosa
DESARROLLO:
1.Rotulamos los tres tubos (SF , SC , SP )
2.Añadimos en cada tubo la cantidad indicada en el siguiente cuadro:
3.En el tubo SF añadimos:1.8 ml de suero fisiologico y 0.2 ml de sangre problema
4.En el tubo SC añadimos:1.8 ml de solucion sacarosa y 0.2 ml de sangre control
5.En el tubo SP añadimos:1.8 ml de solucion sacarosa y 0.2 ml de sangre problema
4.En el tubo SC añadimos:1.8 ml de solucion sacarosa y 0.2 ml de sangre control
5.En el tubo SP añadimos:1.8 ml de solucion sacarosa y 0.2 ml de sangre problema
6.Agitamos suavemente los tubos
7.Dejamos reposar durante 30 minutos
8.Centrifugamos los tubos 2000 rpm durante 5 minutos
9.Leemos los resultados con el espectrofotometro,añadiendo la cantidad siguiente:
10.En el tubo TB añadimos:5 ml de solución de amoniaco y 0.3 ml de suero fisiologico
11.En el tubo TPR añadimos:5 ml de solución de amoniaco y 0.3 ml de sobrenadante del tubo SP
12.En el tubo TPA añadimos:5 ml de solución de amoniaco y 0.3 ml de liquido resuspendido del tubo SF
10.En el tubo TB añadimos:5 ml de solución de amoniaco y 0.3 ml de suero fisiologico
11.En el tubo TPR añadimos:5 ml de solución de amoniaco y 0.3 ml de sobrenadante del tubo SP
12.En el tubo TPA añadimos:5 ml de solución de amoniaco y 0.3 ml de liquido resuspendido del tubo SF
RESULTADOS:
LECTURA DE LOS RESULTADOS:
Hay dos tipos de resultados:
- Visual:Cuando se considera que no hay hemolisis , se observa un botón sedimentario rojizo y un liquido sobrenadante incoloro y transparente.Se estima que hay hemolisis cuando se advierte la presencia de un liquido rojizo y transparente , en los tubos SF y SC no tiene que haber hemolisis , ya que estos tubos funcionan como controles negativos
- Espectrofotometrica:Se requiere la preparación de tres tubos :
- Tubo blanco 0
- Tubo patrón 0.065
- Tubo problema 0.206
Se lee la absorbancia a 540 nm
% de hemolisis= A/AM *100
% de hemolisis= 0.065/0.206*100= 31.55%
% de hemolisis= 0.206/0.206*100= 100%
INTERPRETACIÓN CLÍNICA DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS:
La prueba de la sacarosa suele ser positiva en la HPM. El grado de positividad que se produce en esta enfermedad oscila entre un 10 y 80% de hemolisis
La prueba de la sacarosa es siempre negativa en la deseritropoyesis congénita tipo II(Hempas).
HOJA DE TRABAJO:
1.¿Con que solución se hemolizan los hematíes vertidos en el tubo problema?
Solución de amoniaco y sobrenadante del tubo SP(ml)
2.¿A que concentración se prepara la solución de la sacarosa?
9.24%
3.¿Como se llama también la sacarosa?
Azúcar común
4.¿Que es el ACD?
Ácido cítrico-dextrosa
5.¿Como se prepara el tubo blanco?
- 5 ml de amoniaco
- 0.3 ml de suero fisiologico
6.¿Que porcentaje de hemólisis suele producirse , con la prueba de la sacarosa , en la sangre de la HPN?
10 y 80 %
RESULTADOS OBTENIDOS:
Lectura espectrofometrica: Tubo A % de hemolisis
Patron 0.206 100%
Problema 0.065 31.55%
VALORACIÓN DE LOS RESULTADOS:
Los hematíes problema: No tienen una sensibilidad aumentada al complemtento
El enfermo :No padece una HPN
