Esta practica valora la resistencia de los hematíes a soluciones de presión osmótica decreciente y para ello se enfrentan a cloruro sódico.
Materiales.
- Dos pipetas Pasteur.
- Ocho tubos de centrifuga que sean iguales.
- Un reloj.
- Una centrifuga.
- Un espectrofotómetro.
- Cubetas de espectrofotómetro.
- Una gradilla.
Reactivo.
- Suero fisiológico, preferivbblemente tamponado a pH (7,4).
- Agua destilada.
Muestra.
Sangre venosa.
Procedimiento.
Los primero que debemos de hacer es preparar 8 tubos de centrifuga que sean iguales entre sí. Los ochos tubos deben estar perfectamente numerados, los cuatro primero se nombraran 1,2,3,4 y los otros cuatro se nombraran 15,16,17 y 18.
A continuación añadimos a cada tubo 50 microlitros de sangre sin que toque la pared de los tubos.Después añadimos al tubo 1 18 gotas de suero fisiológico tamponado, al tubo 2 se le añade 1 gota de agua destilada y 17 gotas de suero fisiológico tamponado, al tubo 3 se le añade 2 gotas de agua destilada y 16 gotas de suero fisiológico, al tubo 4 se le añade 3 gotas de agua destilada y 15 gotas de suero fisiológico tamponado, al tubo 15 se el añade 14 gotas de agua destilada y 4 gotas de suero fisiológico tamponado, al tubo 16 se le añade 15 gotas de agua destilada y 3 gotas de suero fisiológico tamponado, al tubo 17 se le añade 16 gotas de agua destilada y 2 gotas de suero fisiológico tamponado y por último al tubo 18 se le añade 17 gotas de agua destilada y 1 gota se suero fisiológico tamponado.
Agitamos suavemente los tubos hasta que se mezcle la sangre con la batería de cloruro sódico y lo dejamos reposar durante 30 minutos a temperatura ambiente. Pasado este tiempo se centrifuga los 8 tubos durante 5 minutos a 2000 rpm.
Por último sacamos el sobrenadante y lo ponemos en las cubetas; estas cubetas las metemos en el espectrofotómetro y anotamos su absorbancia.
Resultado.
Tubo 1 ---> 0,248
Tubo 2 --->1,001
Tubo 3 ---->0,694
Tubo 4 --->0,532
Tubo 15 --->0,964
Tubo 16 --->1,021
Tubo 17 --->1,022
Tubo 18 --->1,060
% de hemólisis = (A/AM)X100
A = Absorbancia del líquido presente en el tubo analizado.
Am= Absorbancia del líquido contenido en el tubo nº 18 ( A máximo)
Tubo 1.
% de hemólisis =( 0,248/1,060)x100 = 23,39 %
Tubo 2.
% de hemólisis = (1,001/ 1,060) x 100= 94,43
Tubo 3.
% de hemólisis= (0,694/1,060) x100= 65,74%
Tubo 4.
% de hemólisis= (0,532/1,060) x100 = 50,18%
Tubo 15.
% de hemólisis= (0,964/1,060) x100 = 90,94%
Tubo 16.
% de hemólisis= (1,021/1,060) x100 = 96,32%
Tubo 17.
% de hemólisis=(1,022/1,060) x100 = 96,41%
Tubo 18.
% de hemólisis=(1,060/1,060) x100 = 100%
Hoja de trabajo.
Tubo nº
|
1
|
2
|
3
|
4
|
5
|
6
|
7
|
8
|
9
|
10
|
11
|
12
|
13
|
14
|
15
|
16
|
17
|
18
|
Agua destilada
(gotas)
|
0
|
1
|
2
|
3
|
4
|
5
|
6
|
7
|
8
|
9
|
10
|
11
|
12
|
13
|
14
|
15
|
16
|
17
|
Suero fisiológico
Tamponado
(gotas)
|
18
|
17
|
16
|
15
|
14
|
13
|
12
|
11
|
10
|
9
|
8
|
7
|
6
|
5
|
4
|
3
|
2
|
1
|
Concentración obtenida
(en g/l)
|
9
|
8,5
|
8
|
7,5
|
7
|
6,5
|
6
|
5,5
|
5
|
4,5
|
4
|
3,5
|
3
|
2,5
|
2
|
1,5
|
1
|
0,5
|
Agitamos suavemente los tubos hasta que se mezcle la sangre con la batería de cloruro sódico y lo dejamos reposar durante 30 minutos a temperatura ambiente. Pasado este tiempo se centrifuga los 8 tubos durante 5 minutos a 2000 rpm.
Por último sacamos el sobrenadante y lo ponemos en las cubetas; estas cubetas las metemos en el espectrofotómetro y anotamos su absorbancia.
Resultado.
Tubo 1 ---> 0,248
Tubo 2 --->1,001
Tubo 3 ---->0,694
Tubo 4 --->0,532
Tubo 15 --->0,964
Tubo 16 --->1,021
Tubo 17 --->1,022
Tubo 18 --->1,060
% de hemólisis = (A/AM)X100
A = Absorbancia del líquido presente en el tubo analizado.
Am= Absorbancia del líquido contenido en el tubo nº 18 ( A máximo)
Tubo 1.
% de hemólisis =( 0,248/1,060)x100 = 23,39 %
Tubo 2.
% de hemólisis = (1,001/ 1,060) x 100= 94,43
Tubo 3.
% de hemólisis= (0,694/1,060) x100= 65,74%
Tubo 4.
% de hemólisis= (0,532/1,060) x100 = 50,18%
Tubo 15.
% de hemólisis= (0,964/1,060) x100 = 90,94%
Tubo 16.
% de hemólisis= (1,021/1,060) x100 = 96,32%
Tubo 17.
% de hemólisis=(1,022/1,060) x100 = 96,41%
Tubo 18.
% de hemólisis=(1,060/1,060) x100 = 100%
Hoja de trabajo.
1º. ¿ Qué concentración de NaCl tiene el suero fisiológico?
9 gramos de cloruro sódico.
2º ¿ En qué porcentaje se puede incrementar normalmente el volumen de los hematíes sin que éstos se rompan?
Se puede incrementar su volumen en un 70 % como máximo.
3º¿Qué sustancia se emplea para anticoagular la sangre en esta prueba?
cloruro sódico.
4º En esta prueba,¿cuál es la concentración salina menor a la que se preparan las soluciones?
9 g/l.
5º En condiciones normales,¿ a qué concentración salina suele producirse una hemólisis del 50%?
a 4,5 y 4 g/l.
6º ¿En qué enfermedades se produce una disminución de la ROE ?
En la esferocitosis hereditaria, estomacitosis hereditaria.
Resultados obtenido.
Lectura visual.
- Primer tubo en el que se observa con claridad una hemólisis parcial: 10
Concentración de la solución salina contenida en este tubo:4,5 g/l
- Primer tubo en el que se aprecia una hemólisis prácticamente total :14
Concentración de la solución salina presente en este tubo :2,5 g/l
Tubo nº
|
A
|
% de hemólisis.
|
1
|
0,248
|
23,39 %
|
2
|
1,001
|
94,43
|
3
|
0,694
|
65,74%
|
4
|
0,532
|
50,18%
|
5
|
No
|
No
|
6
|
No
|
No
|
7
|
No
|
No
|
8
|
No
|
No
|
9
|
No
|
No
|
10
|
No
|
No
|
11
|
No
|
No
|
12
|
No
|
No
|
13
|
No
|
No
|
14
|
No
|
No
|
15
|
0,964
|
90,94%
|
16
|
1,021
|
96,32%
|
17
|
1,022
|
96,41%
|
18
|
1,060
|
100%
|
- Concentración de la solución salina que da lugar a una hemólisis del 50% : 4 g/l
Valoración de los resultados.
- La fragilidad osmótica de los hematíes contenidos en la sangre estudiada es: Normal.
- La ROE de la sangre analizada es: normal.
