domingo, 17 de mayo de 2015

DETERMINACIÓN SÉRICA DEL GRUPO ABO Práctica LVII del libro, pag 561

DETERMINACIÓN SÉRICA DEL GRUPO ABO

FUNDAMENTO:
El suero de un individuo solo debe contener anticuerpos frente a los antígenos que no están presentes en sus propios hematíes.Por ello,al hacer reaccionar este suero con hematíes conocidos del grupo A y del grupo B,solo producirá aglutinación en el caso de ser enfrentado a eritrocitos con antígenos distintos a los de sus propios hematíes.
Esta técnica puede realizarse tanto en porta como en tubo,aunque se prefiere la determinación en tubo porque la centrifugacion de los hematíes intensifica el fenómeno de aglutinación

MATERIAL:
  • Tubo de centrifuga
  • Pipeta pasteur
  • Baño maría
  • Centrifuga
  • Reloj
  • Rotulador
  • Papel de fieltro
  • Gradilla
  • Guantes
  • Micropipeta
  • Puntas de micropipeta
  • Vaso de precipitado 
  • Vaso de precipitado para residuos
  • Para film
REACTIVOS:
  • Hematíes del grupo A1
  • Hematíes del grupo A2
  • Hematíes del grupo B
  • Hematíes del grupo 0
  • Hematíes de la sangre problema
MUESTRA:
Suero

DESARROLLO:
  1. Cogemos un 1 ml de sangre con una micropipeta y echamos una cantidad de suero salino
  2. Centrifugamos los tubos a 2.000 rpm durante 4 minutos
  3. Retiramos el sobrenadante
  4. Repetimos dos veces mas el proceso anterior
  5. Añadimos en otros 4 tubos dos gotas de sangre de cada grupo y 5 ml de suero fisiológico
  6. Rotulamos un tubo de centrifuga con la letra A1; A2;B;0
  7. Añadimos a cada tubo dos gotas de suero problema
  8. Depositamos una gota de la suspensión de hematíes que se corresponderá con la letra del tubo rotulado.
  9. Agitamos suavemente y centrifugamos a 1000 rpm durante 1 minuto
  10. Golpeamos suavemente el extremo inferior de los tubos 
RESULTADO:
LECTURA DE LOS RESULTADOS
  • Si aparecen unos grumos rojos flotando en un liquido claro indica que existe aglutinación.
  • En el caso contrario, los hematíes se resuspenden homogéneamente dando lugar a un liquido de color rojizo

INTERPRETACIÓN CLÍNICA DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS
El grupo eritrocitario que se asignara,atendiendo a los resultados obtenidos,se puede ver en el siguiente cuadro:

Tubo A1
Tubo A2
Tubo B
Tubo 0
Tubo C
ac presentes en el suero
Grupo eritrocitario
-
-
+
-
-
Anti-B
A1
- o +*
-
+
-
-
Anti –B y anti-A
A2
+
+
-
-
-
Anti-A
B
+
+
+
-
-
Anti-A y anti-B
0
-
-
-
-
-
Ninguno
A1B
-o+”
-
-
-
-
Niguno o anti-A1
A2B
+
+
+
+
+
Autoanticuerpos
Initerpretable
+ = Aglutinación
- = No aglutinación
* = Este anti-A1 se encuentra solo en un 2% de los individuos A2
0 = Este resultado se observa solo en el 25% de los individuos A2B

ES difícil confirmar el grupo sanguíneo por esta técnica en el caso los recién nacidos ,ya que sus anticuerpos no están bien desarrollados aun.También encontramos dificultades en los pacientes con agammaglobulinemia,ya que carecen de anticuerpos y en aquellos que poseen otros anticuerpos específicos o inespecificos capaces de reaccionar con los antígenos del grupo ABO
HOJA DE TRABAJO:
1.¿Que son los hematíes tipados?
Los que sabemos de que tipo son.
2.¿A que dilucion empleamos los hematíes del paciente?
5%.
3.¿Que clase de muestra se emplea en esta técnica?
Suero.
4.¿Que ocurre cuando el tubo C presenta aglutinación?
Que hemos cometido algún error.

RESULTADOS OBTENIDOS:


Aglutinación
No aglutinación
Tubo A1
 NO
NO
Tubo A2
NO
NO
Tubo B
NO
NO
Tubo 0
NO
NO
Tubo C
NO
NO

VALORACIÓN DE LOS RESULTADOS:
  • Los AC encontrados en el suero son: Nada
  • El grupo eritrocitario de la sangre amalizada es: Nada


OBSERVACIONES:

Nos han salido las dos veces negativas , la primera la hemos echo con los hematíes de suspensión de 2.5% , con dos gotas de suero y la segunda vez la hemos echo con 6 gotas de hematíes y 2 de suero y tampoco ha salido aglutinación

PREPARACIÓN DE LA SUSPENSION DE HEMATIES TIPADOS

PREPARACIÓN DE LA SUSPENSION DE HEMATIES TIPADOS

  1. Tomar 1 ml de sangre ABO conocida y completar con solución salina 3 ml
  2. Centrifugar 4 min. a 2000 rpm.
  3. Quitar sobrenadante
  4. Volver a añadir 3 ml de solución salina y centrifugar y quitar sobrenadante 2 veces más.(en total añadimos, centrifugamos y retiramos sobrenadante 3 veces).
  5. Preparar hematíes al 2%, lo haremos añadiendo en un tubo 2 gotas de hematíes y 5 ml de solución salina

DETERMINACIÓN CELULAR EN TUBO, Práctica LVI, pag 558 del libro,23-04-2015

DETERMINACIÓN CELULAR EN TUBO

Fundamento

Los hematíes de deben enfrentar a sueros conocidos que tengan anticuerpos frente a los antígenos. Por último tenemos que observar si hay aglutinación o no en los hematíes.

Materiales.
  • Tubos de centrifuga
  • Rotulador de vidrio
  • Pipeta pasteur 
  • Centrífuga
  • Gradilla.
Reactivos.
  • Suero anti-A
  • suero anti-B
  • Suero anti-AB
  • Solución salina fisiológico.

Muestra
  • Sangre total anticoagulada.(Es preferible utilizar una suspensión de los hematíes problemas).
Procedimiento

Lo primero que realizamos es el lavado de los hematíes.
Para ello depositamos 1 ml de sangre y lo completamos con solución salina, lo agitamos y lo centrifugamos a 2000 rpm durante 4 minutos. Después desechamos el sobrenadante y volvemos a realizar el paso anterior 2 veces más. 
En la última centrifugación que realizamos desechamos el sobrenadante y preparamos hematíes al 2 %.
 En un tubo depositamos 2 gotas de los hematíes lavados y 5 ml de suero fisiológico lo agitamos y así obtenemos una suspensión al 2 %.
Rotulamos 3 tubos de ensayo con las letras A, B y AB, a cada uno de estos tres tubos le depositamos una gota de suspensión de hematíes al 2 %. Luego estos tres tubos que son pequeños lo metemos dentro de otros tubos un poco más grande y al tubo A le depositamos dos gotas del suero anti-A , al tubo B le depositamos  dos gotas de suero anti-B y al tubo AB le depositamos dos gotas de suero anti-AB y agitamos los tubos . Por último tapamos cada tubo con papel parafim y lo centrifugamos a 1000 rpm durante 1 minuto y observamos si hay aglutinación.








Hoja de trabajo

1. ¿Qué tipo de técnica inmunológica se emplea en este análisis ?
Determinación celular en tubo.

2. ¿A qué concentración se prepara la suspensión de hematíes problemas ?
Al 2 %

3. ¿Cómo se ve una aglutinación positiva ?
Se observa un botón de hematíes que permanecen unidos una vez desprendido el sedimento.

4. ¿A qué se debe el fenómeno de Rouleaux?
Consiste en una agrupación no específica de hematíes, que adoptan una imagen de pila de monedas.

5.¿Cómo se pueden evitar los falsos positivos ?
Con el lavado previo de los hematíes problema.

Resultado obtenido.
Se observa aglutinación en el tubo A.

Valoración de los resultados obtenidos.
 La sangre ensayada es del grupo eritroitario A

sábado, 16 de mayo de 2015

DETERMINACIÓN CELULAR EN PORTA Práctica LV del libro, pag 556, 22-04-2015

DETERMINACIÓN CELULAR EN PORTA

Fundamento

Consiste en observar la aglutinación de los hematíes enfrentados a una serie de antisueros conocidos i de reconocida eficacia, para determinar el grupo ABO del individuo.

Material necesario
  • Un portaobjetos o tarjeta visualizadora de fondo blanco.
  • Un rotulador de vidrio.
  • Una pipeta pasteur desechable.
  • Palillos mezcladores.
  • Un reloj.
Reactivos
  • Suero anti-A.
  • Suero anti-B.
Muestra
  • Sangre capilar o sangre total anticoagulada, citratada o oxalatada.
Técnica
  • Dividir un portaobjetos en dos secciones con el rotulador de vidrio. Marcar una con la letra A y otra con la letra B.
  • Depositar una gota de suero anti-A (Azul) en la sección A del portaobjetos, y una gota del suero anti-B (amarillo) en la sección B.
  • Situar una pequeña gota de sangre (aprosimadamente la mitad del volumen usado de antisuero) junto a la gota de antisuero.
  • Mezclar ambas gotas en cada sección utilizando un palillo distinto en cada una de ellas y formando un circulo de 2 a 2,5 cm de diámetro.
  • Hacer oscilar suavemente el portaobjetos hacia delante y hacia detrás , durante dos minutos.
  • Observar la presencia o ausencia de aglutinación.
Lectura de resultados

Hay aglutinación cuando aparecen unos grumos rojos que flotan en un líquido claro. En el caso contrario, los hematíes permanecen en forma de suspensión homogénea de color rojizo.

La presencia o ausencia de aglutinación puede confirmarse mediante examen microscópico de las mezclas.

En general estas pruebas son muy eficaces ya que la presencia de plasma en la muestra aumenta la velocidad de la reacción y el tamaña de los grumos. El resultado puede observarse en unos segundos, aunque conviene reexaminar la reacción del anti-A al cabo de 2 minutos para comprobar que no se ha pasado por alto ninguna reacción débil. Éstas suelen ocurrir en menos de un 1% de la muestras analizadas.

INTERPRETACIÓN CLÍNICA DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS

El grupo eritrocitario que se le asignarça, atendiendo a los reultados obtenidos, se puede ver en el cuadro siguiente:

Hematíes y suero anti-A
Hematíes y suero anti-B
Grupo eritrocitario
+
-
A
-
+
B
+
+
AB
-
-
0

+ =  presencia de aglutinación
-  =   ausencia de aglutinación

En el caso de que el grupo obtenido sea el A, los hematíes problema deberán ser ensayados de nuevo con lectina anti-A1; de forma que si se produce aglutinación, el sujeto pertenecerá al subgrupo A1.

Hoja de trabajo

  1. ¿Qé tipo de técnica inmunológica se emplea en este análisis?. Aglutinación.
  2. ¿Qué muestra  utilizamos?. Sangre capilar.
  3. ¿Cómo se ve la aglutinación positiva?. Grumos rojos que flotan en el líquido antisuero.
  4. ¿Qué debemos hacer si el grupo obtenido es A?. En el caso de que el grupo obtenido sea el A, los hematíes problema deberán ser ensayados de nuevo con lectina anti-A1; de forma que si se produce aglutinación, el sujeto pertenecerá al subgrupo A1.
Resultados obtenidos

Valoración de los resultados

La sangre analizada es del grupo eritrocitario: A1, 0 y B.


 A

A y 0

A, 0 y B

 A1



Esta es la gráfica de los grupos sanguíneos en la clase


jueves, 30 de abril de 2015

PRUEBA DE MEZCLA CON PLASMA NORMAL Práctica XLV del libro, pag 362, 10-03-2015

PRUEBA DE MEZCLA CON PLASMA NORMAL

FUNDAMENTO:
Se dertemina cuando el TP normal y un TTPA alargado, en esta circunstancia se supone , que el paciente sufre un deficit de algun factor de la via intrinseca y en concreto , de los factores VIII , IX o XII
  • Si el TTPA determinado en la mezcla se corrige falta , en el plasma problema, algunno de los factores de la via intrinseca que , sin embargo , si esta presente el el PPP normal
  • Si el TTPA de la mezcla no se corrige con respecto al del PPP problema puro , el trastorno coagulatorio se debe a otros motivos  
MATERIAL:
  • Micropipeta
  • Tubo de plastico
  • Baño María
  • Coagulometro
  • Cubetas de coagulometro
  • Trozo de metal
  • Vaso de precipitado
  • Puntas de micropipeta
REACTIVOS:
  • Cloruro calcico 0.025M
  • Cefalina activada
  • Pool de plasma control normal
MUESTRA:
Plasma pobre en plaquetas (55 ul)
Plasma control normal (55ul)


DESARROLLO:
PROCESO 1
1. Cogemos un tubo de plástico y le ponemos 55 ul de ppp con la ayuda de una micropipeta de 10-100ul y 55 ul de serican anormal
2. Lo introducimos en el Baño María durante 15 minutos a 37 grados centígrados
3. Cuando lo sacamos del baño Maria , ponemos una cubeta en el coagulometro y añadimos 100 ul
4. Añadimos un trozo de acero y lo dejamos 2 minutos en el coagulometro
5.Ponemos 100 ul de cefalina activada
6. Cuando queden 20 segundos se saca la cubeta y la introducimos debajo del tapón rojo, lo tapamos y introducimos 100 ul de cloruro calcico
PROCESO 2
1.Igual que el proceso número uno , pero solo se diferencia que este se hace solo con el Baño Maria , lo cual tenemos que dejarlo durante 5 minutos , y trascurrido ese tiempo ir sacando cada 10 segundos para ver cuanto tiempo tarda en coagular.
RESULTADO:

LECTURA DE LOS RESULTADOS

El TTPA es le tiempo transcurrido desde la adición del CaCl2 hasta la formación del coagulo de fibrina
Los valores normales del TTPA están comprendidos entre 30 y 40 segundos.

INTERPRETACIÓN CLÍNICA DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS

  • Si el TP es normal y el TTPA esta alargado , el enfermo . probablemente , padecerá un trastorno de la vía intrínseca. En este caso se debera repetir la determinacion del TTPA, pero incubando la mezcla con plasma y cefalina activada durante 15 minutos 
  • Si tras la mezcla con plasma normal , el TTPA no se corrige , es decir, deja de estar alargado , falta algun factor de la via intrinseca
  • Si por lo contrario , tras la mezcla con plasma normal , no se corrige el TTPA , se debe investigar la presencia en el plasma de un inhibidor de la coagulacion


HOJA DE TRABAJO

1.    ¿Cuando debe hacerse una prueba de mezcla con plasma normal?
Cuando el plasma problema se determina un TP normal y un TTPA alargado
2.    Si tras la mezcla con plasma normal, no se corrige el TTPA, ¿Qué se debe investigar?
La presencia en el plasma de un inhibidor de la coagulación.

RESULTADOS OBTENIDOS

Tras la mezcla del plasma problema anómalo con plasma normal:
No se ha corregido el TTPA

VALORACIÓN DE LOS RESULTADOS

La prueba realizada indica:
observaciones


En el baño Maria ha durado 60 segundos y en el coagulometro lo hemos hecho dos veces y la primera nos ha quedado bastante corta y la otra normal.