PRUEBA CRUZADA MAYOR
Consiste en enfrentar el suero del receptor con los hematíes del donante , primero en medio salino, posteriormente en medio albuminoso y por último frente al suero antiglobulina de Coombs. con este último paso detectaremos los anticuerpos que se hayan quedado fijados en la membrana eritrocitaria.
Es importante respetar los tiempos de incubación para evitar posibles errores en la técnica.
Material necesario
- Tubos de hemólisis
- Centrífuga
- Baño de agua y
- Pipetas pasteur
- Gradilla
- Reloj
- Reactivos
- Solución salina fisiológica
- Albúmina bovina al 30 %
- Suero antiglobulina de coombs
Muestra
Suero del receptor obtenida de sangre coagulada y libre de hemólisis debe de ser fresco menos de 24 horas desde la extracción y conservado a 4 grados centígrados
Hematíes del donante previamente lavado tres veces en solución salina fisiológica y resuspendidos en ella al 2-5%.
Técnica
1. En un tubo de hemólisis depositamos una gota de la suspensión de hematíes del donante y 2 gotas dé suero del receptor.
2. Mezclamos suavemente y dejamos a temperatura ambiente durante 2 ó 3 minutos.
3. Centrifugamos a 3000 r.p.m durante 30 segundos.
4. Leemos el resultado obtenido en medio salino.
5. Añadimos al tubo 3 gotas de albumina bovina al 30%.
6. Mezclamos bien e incubamos a 37º C durante 30 minutos.
7. Centrifugamos a 3000 rpm. durante 1 minuto.
8. Leemos el resultado obetenido en medio albuminoso.
9. Lavamos 3 veces los hematíes con solución salina para eliminar los anticuerpos que no se han fijado a los eritrocitos. Retiramos bien todo el sobrenadante del último lavado.
10. Añadimos al tubo una gota de antiglobulina humana de Coombs. Mezclamos bien.
11. Centrifugamos a 1000 rpm durante 2 minutos.
12. Leemos los resultados.
Lectura de resultados obtenidos
La lectura de los resultados se realiza resuspendiendo el boton hemático con suavidad después de cada una de las centrifugaciones.
En caso de reacciones débiles positivas, conviene observar al microscopio entre porta y cubre con objetivo de 40 X.
Interpretación clínica de los resultados obtenidos.
La ausencia de aglutinación en todos los pasos indica que las sangres son compatibles, y por tanto, la transfusión es posible.
La algutinación en cualquiera de las fases de la prueba indica incompatibilidad.
Si se observa hemólisis en cualquiera de los pasos, tambien indica incompatibilidad.
Hoja de trabajo
- ¿Qué se enfrenta en la prueba cruzada Mayor?. Suero del paciente (receptor), con hematíes del lavados previamente 3 veces del donante.
- Cuando se debe realizar la prueba cruzada menor?. Se realiza cuando se transfunde una gran cantidad de plasma, ya que en este caso, la presencia de anticuerpos en la sangre del donante puede ser peligrosa.
- ¿Por qué debemos realizar la prueba en medio salino y albuminoso?. Para detectar todos los anticuerpos presentes.
- ¿Qué pone de manifiesto el suero antiglobulina de Coombs?. Los anticuerpos que se hayan queado fijados en la membrana eritrocitaria.
Coagulación en medio salino.
Valoración de los resultados:
Las sangres analizadas son incompatibles.
