TINCIÓN DE GIEMSA
Introdución
Las tinciones hematológicas tipo Romanowsky utilizan azul de metileno y sus productos de oxidación (azur A, azur B, azur C) como colorantes básicos, combinandolos con la eosina como colorante ácido.
De este modo, obtenemos una tinción diferencial, es decir, una tinción que es capaz de discriminar entre las distintas estricturas celulares según se tiñan éstas con el colorante ácido, con el básico o con la mezcla de ambos.
Según la proporción de azul de metileno y de eosina que compongan el colorante tendremos distintos métodos de tinción. Entre ellos, los más conocidos son el método de Giemsa, el de Wright, el de Leishman y el d panóptico de Pappenheim.
Metódica
Es un extracto de las técnicas de tinción hematológicas de la casa Panreac.
Fundamento
Utilizamos como colorante la mezcla de azul de merileno y eosina propuesta por Giemsa.
Material necesario:
Muestra
Sangre capilar fresca o venosa anticoagulada. El anticoagulante de elección es la heparina o el EDTA, ya que el citrato sódico y el oxalato potásico pueden dar preparaciones defectuosas.
Técnica
Lectura de resultados
UNa vez seca la tinción, echamos una gota de aceite de inmersión y examinamos al microscopio óptico con el objetivo de 100 x.
Los eritrocitos se tiñen de color rosa asalmonado y las plaquetas de color violeta.
Los neutrófilos presentan el núcleo de color azul violeta, el citoplasma rosa y la granulación de un color violeta rojizo.
Los eosinófilos se observan con el núcleo azul violeta, el citoplasma azul y los grñanulos de color rojo anaranjado.
Los basófilos presentan un núcleo de color púrpura y granulación de color azul oscuro.
Los monocitos y linfocitos se observan con un núcleo color violeta y el citoplasma azul, un poco más claro en el monocito.
Metódica
Es un extracto de las técnicas de tinción hematológicas de la casa Panreac.
Fundamento
Utilizamos como colorante la mezcla de azul de merileno y eosina propuesta por Giemsa.
Material necesario:
- Microscopio óptico.
- Portas bien límpios.
- Cristalizador.
- Pùentes de tinción.
- Pipetas pasteur con chupete.
- Frascos lavadores.
- Tubos de ensayo.
- Colorante en solución según Giemsa de Panreac.
- Solución tampón pH de Panreac.
- Metanol.
- Aceite de inmersión.
Muestra
Sangre capilar fresca o venosa anticoagulada. El anticoagulante de elección es la heparina o el EDTA, ya que el citrato sódico y el oxalato potásico pueden dar preparaciones defectuosas.
Técnica
- Preparamos un frotis sanguíneo.
- Colocamos el frotis sobre el puente de tinción, en el cristalizador y en posición horizontal.
- Cubrimos el frotis con metanol durante 3 minutos. Escurrimos y lo dejamios secar al aire. Con esto procedemos a fijar el frotis.
- Diluimos en un tubo de ensayo 0,2 ml de azur-eosina-azul de merileno según Giemsa con 2 ml de solución tampón pH 7,2. Es importante realizar esta dilución en el momento de la tinción, ya que el colorante precipita y no es válido para otro día.
- Mezclamos suavemente en el tubo y con una pipeta Pasteur cubrimos el frotis con la dilución de colorante, dejándolo actuar durante 25 minutos.
- Escurrimos y lavamos con agua del grifo. Posteriormente lavamos con tampón pH 7,2 has eliminar los restos del colorante. Dejamos escurrir y secamos en posición vertical.
Lectura de resultados
UNa vez seca la tinción, echamos una gota de aceite de inmersión y examinamos al microscopio óptico con el objetivo de 100 x.
Los eritrocitos se tiñen de color rosa asalmonado y las plaquetas de color violeta.
Los neutrófilos presentan el núcleo de color azul violeta, el citoplasma rosa y la granulación de un color violeta rojizo.
Los eosinófilos se observan con el núcleo azul violeta, el citoplasma azul y los grñanulos de color rojo anaranjado.
Los basófilos presentan un núcleo de color púrpura y granulación de color azul oscuro.
Los monocitos y linfocitos se observan con un núcleo color violeta y el citoplasma azul, un poco más claro en el monocito.
HOJA DE TRABAJO
1º ¿Cuáles son los anticoagulantes más adecuados para esta técnica?
Es la heparina o el EDTA.
2º ¿Con qué reactivo fijamos el frotis?
Con metanol durante 3 minutos.
3º ¿Cuánto tiempo debe actuar el colorante en el frotis?
Durante 25 minutos.
