PREPARACIÓN DE GOTA GRUESA
Introducción
El paludismo es una enfermedad producida por parásitos del genero Plasmodium.
El paludismo es una enfermedad producida por parásitos del genero Plasmodium.
Los parásitos palúdicos, en algunas etapas de su ciclo vital, se encuentran en la sangre periférica. En esta pueden observarse infectando a los hematíes o, también, en el exterior de los mismos.
PROCEDIMIENTO
Fundamento
Para el estudio microscópico rutinario de muestras sanguíneas susceptibles de contener parásitos palúdicos, se hace una preparación en forma de extensión fina y otra de gota gruesa en el mismo porta.
Cuando se observan extensiones sanguíneas finas para establecer o confirmar un diagnóstico de paludismo, debe prestarse atención a los hematíes infectados y a los parásitos que hay dentro de ellos.
Material necesario:
- Un tubo capilar heparinizado, si la muestra es sangre capilar, o no heparinizado, si la muestra es sangre venosa anticoagulada.
- Una pipeta Pasteur.
- 2 portaobjetos.
- 2 cubetas de tinción con sus repectivos cestillos.
- Metanol
- Agua destilada o desionizada.
- Una solución de colorante Giemsa al 3% en agua destilada o desionizada.
Antes de usarse, debe mezclarse bien.
Sólo sirve durante las primera 8 horas transcurridas desde su preparación.
Muestra
- Sangre capilar o venosa anticoagulada con heparina o EDTA.
Técnica
- Con la mano izquierda, sujetar un portaobjetos limpio sólo por los bordes.
- Situar una pequeña gota de sangre en el centro del portaobjetos.
- Colocar sobre el portaobjetos tres gotas de sangre algo más grandes, a un centímetro de distancia de la gota situada anteriormente y a la derecha de la misma.
- Estas tres gotas deben ocupar los vértices de un pequeño e imaginario triángulo equilatero cuya base está dirigida hacia la gota pequeña.
- Utilizando otro portaobjetos limpio, realizaremos la extensión de la gota pequeña en capa fina.
- Con una esquina del segundo portaobjetos, unir con movimientos rápidos y circulares (de 3 a 6 movimientos), las 3 gotas de sangre mas grandes, hasta extenderlas formando una capa gruesa y uniforme. Al mover de esta forma la sangre, se logra la desfibrinación de la misma.
- Dejar secar la preparación, con el portaobjetos situado en posición horizontal, y protegerla de las moscas, el polvo y el calor excesivo.
- Fijar, únicamente, la extensión fina, para ello, se depositan sobre su superficie 3 gotas de metanol y se deja que éste actúe durante algunos segundos.
- La gota gruesa debe dejarse secar durante 24 horas.
- Transcurrido ese tiempo, verter solución colorante (Gienmsa al 3%) en una cubeta de coloración.
- Colocar la preparación en el cestillo de la cubeta de coloración que contiene colorante.
- Sumergir la preparación, en la solución de Giemsa, durante 30-45 minutos, durante este tiempo la preparación debe de estar al abrigo de la luz solar.
- Verter agua limpia en otra cubeta de coloración
- Aclarar la preparación, sumergiéndola en la cubeta de agua limpia, durante algunos segundos Esta última operación puede repetirse una vez más.
- Dejar secar la preparación, situándola en posición vertical.
Lectrura de resultados
Cuando el emfermo estudiado padece un paludismo, en la extensión fina pueden encontrarse distintas formas evolutivas de los parásitos palúdicos, tanto en el interior de los hematíes como fuera de ellos. Ëstaas son las siguiientes:
Los puntos Schüffner son motas rojas, que se observan en el interior de los eritrocitos, en infestaciones por Plamodium vivax y ovale.
Los puntos de Maurer son motas rojo-malva, que se observan en el interior de los eritrocitos, en infestaciones por Plasmodium falciparum.
Los merozoitos se observan como agrupaciones de pequeños parçasitos que pueden estar presentes en el interior de los eritrocitos o libres de plasma.
- Puntos de Schüffner y de Maurer:
Los puntos Schüffner son motas rojas, que se observan en el interior de los eritrocitos, en infestaciones por Plamodium vivax y ovale.
Los puntos de Maurer son motas rojo-malva, que se observan en el interior de los eritrocitos, en infestaciones por Plasmodium falciparum.
- Formas en anillo (esquizontes anulares):
- Formas ameboideas (esquizontes ameboides):
- Conglomerados de merozoitos (esquizontes maduros):
Los merozoitos se observan como agrupaciones de pequeños parçasitos que pueden estar presentes en el interior de los eritrocitos o libres de plasma.
- Gametocitos libres en plasma.
En la gota gruesa de los hematíes están lisados, ya que ésta no ha sido fijada antes de ser teñida. Por lo tanto en ella, las formas evolutivas de los parásitos palúdicos se observan libres y más patentes.
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS
Puede hacerse un recuento aproximado de los parásitos palúdicos encontrados, mediante un código de cruces, tal y como se indica en el siguiente cuadro:
NÚMERO DE PARÁSITOS CRUCES ASIGNADAS
De 1 a10 por 100 campos de gota gruesa +
De 11 a 100 por 100 campos de gota gruesa ++
De 1 a 10 por campo de gota gruesa +++
Más de 10 por campo de gota gruesa ++++
Hoja de trabajo
1º. ¿Qué colorante se utiliza para teñir la preparación de gota gruesa?
Giemsa al 3% en agua destilada o desionizada.
2º. ¿Cómo están los hematíes en la preparación de gota gruesa?
Los hematíes estan lisados.
3º. ¿Con qué sustancias se fija la preparación de gota gruesa?
Solo se fijará la parte extendida ( la parte fina) con 3 gotas de metanol.
Resultados obtenidos:
En la preparación de la gota gruesa:
Los hematíes están lisados
Valoración de los resultados:
La extensión debe ser considerada como válida.
El individuo del que procede la muestra de sangre debe ser considerado como:
No infestado por Plamodium.
