DETECCIÓN DE CRIOGLOBULINAS Práctica XXXIII del libro pag:257

DETECCIÓN DE CRIOGLOBULINAS

INTRODUCCIÓN

     Las crioglobulinas son inmunoglobulinas aisladas o complejos inmunes que están alterados. Esta alteración hace que se vuelvan insolubles y precipiten en el suero cuando están expuestas a una temperatura inferior a la normal del cuerpo humano ( unos 37 ºC).

     Antes o durante el proceso de precipitación, también se pueden producir una fijación de componentes del complemento a la crioglobulina.

     Se distinguen 3 clases crioglobulinas:

• Crioglobulinas tipo I.

     Consiste en una inmunoglobulina monoclonal (IgG o IgM) (paraproteína)

     Se encuentra en el suero a una concentración (> 5 mg/ml).

• Crioglobulinas tipo II.

     Son complejos de una inmunoglobulina monoclonal  (de clase IgM) y de otra policlonal (generalmente de clase IgG) que funciona como antigeno (Ag).

 
     Se hallan en el suero a una concentración mediana (1-5 mg/ml).

• Crioglobulinas tipo III.

     Son las que se producen más frecuentemente.

     Están formadas por 2 inmunoglobulinas policlónicas (habitualmente una de la clase IgG y otra de la clase IgM). Ademas suelen incluir un componente de complemento.

     Su concentración sérica es muy baja (< 80 microgramos/ml).

METÓDICA

Fundamento

     La detección de crioglobulinas se basa en la exposición del suero problema a la acción de una temperatura baja (unos 4 ºC, pues ésta es la temperatura a la que las crioglobulinas precipitan más).

     Si el suero problema contiene crioglobulinas, éstas precipitan con el frío, y el precipitado formado adopta el aspecto de partículas blanquecinas.

Material

• Una pipeta Pasteur.
• Un tubo de ensayo.
• Una gradilla.
• Una nevera.
• Un baño de agua.
• Un capilar de microhematocrito no heparinizado.
• Plastilina.
• Una centrífuga de microhematocrito.
• Una regla o un lector de microhematocrito.

Muestra

• Suero transparente, obtenido de sangre coagulada completamente a temperatura corporal, y separado del coagulo en un ambiente cálido.

     Es importante evitar que la coagulaciòn se produzaca en un ambiente frío, pues esto puede dar lugar a la formación de una pequeña contidad de crioglobulinas.

Técnica

1. Depositar el suero problema en un tubo de ensayo.
2. Colocar el tubo que contiene el suero problema en una nevera, de forma que esté a una temperartura comprendida entre los 4 y los 6 ºC.
3. Examinar el tubo a los 30 minutos y después cada día, durante 6 días.

 Lectura de resusltados

• Si aparecen partículas blanquecinas en el suero, éste ha de ser incubado a 37 ºC.

     Cuando no desaparecen las partículas, traas la incubación, se considera que éstas se deben a restos de fibrina.
     Sin embargo, cuando las partículas desaparecen, se estima que son crioglobulinas precipitadas (prueba positiva).

• El grado dd positividad de la prueba puede ser establecido de la siguiente manera:

ASPECTO DEL SUERO	GRADO DE POSITIVIDAD
Discretamente turbio	+
Francamente turbio	++
Lechoso	+++

     En el caso de que la prueva sea positiva, puede realizarse una semicuantificación de las crioglobulinas presentes en el suero, mediante determinación del criocrito.

     Éste se mide de la siguiente manera:

1. Llenar un tubo capilar de hematocrito con el suero problema, hasta l las 3/4 partes de su longitud.
2. Sellar con plastilina el extremo del tubo por el que ha entrado el suero.
3. Enfriar el tubo a 4 o 6 ºC, hasta que se produzca la precipitación máxima de las crioglobulinas.
4. Centrifugar el tubo a una 12000 g durante 5 minutos.
5. Calcular el porcentaje que supone la columna de pre ipitado, con respecto a la columna total del suero.

     El criocrito es, por lo tanto, la relación existente entre el volumen ocupado por el precipitado de crioglobulinas y el ocupado por el suero total, expresada en forma de porcentaje.



INTERPRETACIÓN CLÍNICA DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS

     Las crioglobulinemias tipo I se asocian a transtornos proliferativos (mieloma múltiple, macroglobulinemia de Waldenström y leucemia linfática crónica.

     Las crioglobulemias tipo II pueden ser idiopáticas o secundarias a distintas enfermedades (transtornos proliferativos, conectivopatías,  hepatopatías crónicas, etc.).

     Las crioglobulinemias tipo III suelen etar relacionadas con infecciones sistémicas y con procesos autoinmunes (glomerulonefritis, lupus eritomatoso deseminado, etc.).

     Las manifestaciones clínicas de las crioglobulinemias se deben a los siguientes fenómenos originados por ellas:

• Aumento de la viscosidad de la sangre.

     Esto puede conducir a una estasis sanguínea en algunos vasos coporales (por ejemplo, en los retinianos y en los conjuntivales) y contribuye a la aparción de transtornos isquémicos.

• Precipitación de las crioglobulinas.

     Se produce en los vasos sanguíneos más distales, pues en éstos la temperatura normal es algo menos que en el resto del cuerpo (30-31 ºC), y es favorecida por la exposición a temperaturas ambientales bajas.

     Origina una obstrucción vascular, que puede ocasionar una acrocianosis, un fenómeno de Raynaud e incluso una isquemia digital con necrosis.

• Depósito de inmunoclomplejos.

     Puede ser causa de la aparición de daños renales (glomerulonefritis) o articulares.

Hoja de trabajo

1. ¿A qué temperatura se debe someter el suero en una detección de crioglobulinas?. Entre 4 y 6 ªC.
2. Si el precipitado no se reabsobe con calor, ¿de qué sustancia está formado?. Fibrina.
3. ¿Cuantas cruces se le asigna  a un suero que adquiere un aspecto lechoso?. 3 cruces.
4. ¿A qué concentración sérica suelen encontrarse las crioglobulinas tipo I?. A > 5 mg/ml.
5. ¿Qué manifestaciones clínicas puede producir una crioglobulinemia?. Aumento de la viscosidad de la sangre, precipitación de las crioglobulinas, depósito de inmunoclomplejos.

Resultados obtenidos

Después de una hora, no había precipitados, 

Valoración de los resultados

En el suero porblema no hay crioglobulinas