RECUENTO DE PLAQUETAS CON HEMACITÓMETRO
METODICA
Fundamento
Para el recuento en cámara de plaquetas, se diluye la sangre problema en un líquido apropiado y posteriormente, se deposita en la cámara de recuento, donde se cuentan las células presente en alguno de los cuadrados de uno de los retículos.
Material necesario
- Un tubo de ensayo, preferentemente, de plástico.
- Una pipeta diluidora de Thoma, para recuento de glóbulos rojos.
- Un tubo de goma con boquilla, adaptable a la pipeta diluidora.
- Gasas.
- Una cámara de recuento, con un retículo tipo Neubauer mejorado.
- Un cubreobjetos, preferentemente, del tipo especialmente diseñado para su uso en recuentos con cámara.
- Un microscopio, preferentemente, de contraste de fases.
- una placa de Petri.
- Papel de filtro.
- Agua destilada o desionizada.
- Líquido de dilución. Hay varios líquidos, pero se recomienda e líquido de dilución suministrado por los laboratorios Spinreact. Este líquido rompe los hematíes, evita la agregación de las plaquetas entre sí y su adhesión a otros elementos, y facilita la visualización de las plaquetas al hacerlas refringentes.
- Sangre capilar o sangre venosa extraída recientemente y recogida en un tubo con EDTA-K3.
1º. Verter, en un tubo de ensayo, el volumen necesario de líquido de dilución para efectuar los ensayos requeridos (aproximadamente, 1 ml para cada determinación).
El volumen de líquido de dilución sobrante no ha de reintegrarse al frasco donde estaba envasado, para no contaminar al resto del líquido de dilución.
2º. Con una pipeta diluidora de tipo Thoma, aspirar la muestra de sangre, adecuadamente homogeneizada, hasta la señal de 1.
3º. Limpiar, con una gasa, la sangre adherida al exterior de la pipeta.
4º. Aspirar el líquido de dilución hasta la señal de 101 de la pipeta.
5º. Agitar la pipeta, con movimientos de suave inversión, durante unos 5 minutos.
6º. Desechar las 5 primeras gotas de dilución que salen de la pipeta.
7º. Cargar, correctamente, una cámara de recuento, con la dilución de sangre que queda en la pipeta.
8º. Colocar la cámara de recuento cargada, en el interior de una cámara húmeda.
Se puede preparar una cámara húmeda con una placa de Petri cerrada, en cuyo interior se deposita un papael de filtro enbebido en agua.
9º. Dejar reposar la cámara de recuento cargada, durante 15 minutos.
La cámara húmeda evita el secamiento de la dilución de sangre presente en la cámara de recuento y el reposo asegura la sedimentación completa de todas las plaquetas.
10º. Colocar la cámara de recuento sobre la pletina del microscopio.
11º. Enfocar uno de los retículos de la cámara de recuento, con un objetivo de bajo aumento (con el de 10 x).
Con este objetivo se observa la homogeneidad de la distribución celular, de forma que, si ésta no es satisfactoria, se efectá una nueva dilución de la muestra.
12º. Enfocar uno de los cuadrados grandes del retículo ( por ejemplo, el central) con el objetivo de mediano aumento (con el de 40 x).
Si se utiliza un microscopio normal, las plaquetaas se viualizan mejor situando el condensador ligeramente bajo.
- Contar la totalidad de las plaquetas depositadas en ese cuadrado grande.
Lectura de resultados
Los trombocitos se observan como corpúsculos redondeados u ovalados, de tamaño muy pequeño y muy refringentes. Hay que procurar no confundirlos con leucocitos, restos eritrocitarios y, sobre todo, con particulas de polvo.
Para calcular el número de plaquetas por mm3 de sangre, se aplica la siguiente fórmula:
PLT / mm3 = P x V x D = P x 1000
- PLT/mm3 = Número de plaquetas por mm3 de sangre.
- P = Número de plaquetas contadas en un cuadrado grande.
- V = Correción de volumen (10).
- D = Corrección de dilución (100).
Si la cifra de plaquetas obtenida es, sospechosamente, muy reducida, se efectúa una dilución menor de la muestra y se cuentan los trmbocitos depositados en varios cuadrados grandes.
Por el contrario, si la cifra de plaquetas obtenida es, sospechosamente, muy elevada, se efectúa una dilución mayor de la muestra.
Esto implica un ajuste de los cálculos necesarios para obtener el PLT/mm3 y tiene por objeto el confirmar los resultados obtenidos.
Hoja de trabajo
1º. ¿Qué tipo de pipeta diluidora se utiliza en el recuento de plaquetas?.
Una pipeta diluidora de Thoma para globulos rojos.
2º. ¿Qué función desempeña el líquido de dilución empleado?.
Este líquido rompe los hematíes, evita la agregación de las plaquetas entre sí y su adhesión a otros elementos, y facilita la visualización de las plaquetas al hacerlas refringentes.
3º. ¿Cuánto líquido de dilución se necesita para efectuar un ensayo?.
1 ml de líquido de dilución.
4º. ¿Con qué se puede preparar una cámara húmeda?.
Con una placa de Petri y papel de filtro húmedo.
5º. ¿Con qué objetivo se cuentan las plaquetas?.
Con el objetivo de 40 x.
6º. ¿Cómo se aprecian los trombocitos en este recuento?.
Refringentes.
Resultados obtenidos
- Número de plaquetas contadas en un cuadro grande:
- Número de plaquetas por mm3 de sangre:
El número de plaquetas obtenido es ....
