CONTAJE DE RETICULOCITOS
INTRODUCCIÓN
Los reticulocitos son eritrocitos inmaduros que contienen, como su nombre indica, un retículo o red cromatínica formada por restos de ARN (ribosomas), Mitocondrias y otros órganos celulares.
Tienen un tamaño de 8 o 9 micrómetros de diámetro. Permanecen en médula ósea unos 2 0 4 días y después salen a sangre periférica, donde terminan el proceso de maduración en unas 24 horas.
Su cantidad en sangre periférica es un reflejo de la actividad eritropoyética medular.
METÓDICA
Fundamento
Podemos observar los reticulocitos al microscopio ótico mediante la tinción con colorantes vitales, azul de metileno nuevo o azul de cresil brillante. Estos colorantes dan lugar a la precipitación de los restos de ARN, y se observan como filamentos de color azul intenso en el interior de la célula.
Según el grado de maduración que posea el reticulocito presentara un modelo de retículo distinto, de ovillo denso en el caso de los más inmaduros o de gránulos escasos para los más maduros. Se pueden clasificar en cuatro grupos distintos:
 |
| Grado I Grado II Grado III Grado IV joven Célula vieja |
- Microscopio óptico
- Tubos de hemólisis
- Pipetas Pasteur.
- Portas.
- Baño de agua
- Sistema de filtración.
Reactivos:
- Azul de cresil brillante en polvo.
- Solución salina al 0,9%.
- Citrato sódico al 3%.
- Agua destilada.
- Aceite de inmersión.
Sangre anticoagulada con EDTA.
Debido a que los reticulocitos también maduran in vitro, es aconsejable que la sangre utilizada se haya extraido recientemente, como máximo 6 horas antes de su análisis.
Técnica.
1. Preparación del colorante:
Mezclamos 80 ml de solución salina y 20 ml de citrato sódico al 3%.
Pesamos 1 gramo de azul de cresil brillante y lo disolvemos en la mezcla anterior.
Filtramos antes de usarlo.
2. Tinción de los reticulocitos:
Es una tinción supravital, es decir, se hace mientras las células aún están vivas.
Para ello echamos 3 gotas de la solución colorante en un tubo de hemólisis y otras 3 gotas de sangre total previamente homogeneizada.
Mezclamos suavemente y tapamos con papel parafilm. Introducimos en el baño de agua a 37 ºC durante 5 minutos
Pasado este tiempo volvemos a homogeneizar y tomamos una gota de la suspensión para depositarla en un porta.
Realizamos una extensión y dejamos secar al aire .
Lectura de resultados
Con una gota de aceite de inmersión observamos la extensión con el objetivo de 100 x.
Los resultados obtenidos no eran buenos ya que el microscopio no esta bien, por lo que no podemos distinguir nada.
Interpretación de los resultados.
Los hematíes debían haberse teñido de un verde amarillento y se distinguirían de los hematíes, por que en su interior se verían como unos hilos finos de color azul.
HOJA DE TRABAJO
1º. ¿Qué son los reticulocitos?
Los reticulocitos son eritrocitos inmaduros que contienen, como su nombre indica, un retículo o red cromatínica formada por restos de ARN (ribosomas), Mitocondrias y otros órganos celulares.
2º. ¿Qué tipo de tinción estamos utilizando?.
Un colorante vital, azul de cresil brillante.
3º. ¿Por qué hacemos la correción del porcentaje de reticulocitos?.
El indice corregido se hace para determinar si es una anemia o una leucemia.
4º. ¿Qué nos expresa el IPR?.
Los días que tarda en madurar el reticulocito en sangre periférica.
Un IPR mayor de 3 nos indica una actividad eritropoyética medular, mientras que un IPR menor de 2 indica una escasa actividad eritropoyética.
Los reticulocitos son eritrocitos inmaduros que contienen, como su nombre indica, un retículo o red cromatínica formada por restos de ARN (ribosomas), Mitocondrias y otros órganos celulares.
2º. ¿Qué tipo de tinción estamos utilizando?.
Un colorante vital, azul de cresil brillante.
3º. ¿Por qué hacemos la correción del porcentaje de reticulocitos?.
El indice corregido se hace para determinar si es una anemia o una leucemia.
4º. ¿Qué nos expresa el IPR?.
Los días que tarda en madurar el reticulocito en sangre periférica.
Un IPR mayor de 3 nos indica una actividad eritropoyética medular, mientras que un IPR menor de 2 indica una escasa actividad eritropoyética.
