DETERMINACIÓN DE LA SIDEREMIA Práctica XIX (fotocopia de valentin) pag 112 del libro. Fecha 22-01-2015

DETERMINACIÓN DE LA SIDEREMIA

Fundamento:  

Determinación de la cantidad de hierro con el espectrofotómetro y aplicando la fórmula.

Material: 

·         Centrífuga,
·         tubos  de ensayo,
·         gradilla,
·         micropipeta,
·         puntas de micropipeta,
·         espectrofotómetro,
·         rotulador de vidrio,
·         cubetas de espectrofotómetro.

Reactivos:  

·         R1 tampón (acetato pH 4'9, 100mmol/l),
·         R2 reductor (ácido ascórbico, 99'7%),
·         R3 color (FerroZine, 40mmol/l), Iron Cal (patrón primario acuoso de Hierro, 100 microgramos por decilitro). 

Muestra: 

Sangre venosa anticoagulada con EDTA

Desarrollo: 

-Colocamos dos tubos de ensayo en la centrífuga (uno con la sangre problema y otro con agua destilada, los dos con la misma cantidad).

-Una vez sacados de la centrífuga, retiramos el sobrenadante (plasma)  y lo colocamos en un tubo de ensayo.

-En cada tubo de ensayo, con el rotulador de vidrio, le escribimos lo que contendrá :

1.       blanco RT,

2.      Patrón,

3.      Blanco muestra y

4.       muestra).

-Preparamos el RT: Disolvemos el contenido de un tubo de R2 reductor en un frasco de R1 tampón, lo tapamos y lo mezclamos suavemente HASTA disolver su contenido.

-Preparamos los tubos de ensayo de la siguiente manera: 

	Blanco RT	Patrón	Blanco muestra	Muestra
RT (ml)	1	1	1	1
R3 (gotas)	1	1	--	1
Agua destilada (µl)	200	--	--	--
Patrón (µl)	--	200	--	--
Muestra (µl)	--	--	200	200

-Después de mezclarlos, los incubamos durante 5 minutos a 37ºC, o 10 minutos a temperatura ambiente.

-En cada una de las cubetas escribimos lo mismo que en en los tubos de ensayo y le añadimos lo de los tubos de ensayo.

-Preparamos el espectrofotómetro para la absorbancia con las siguiente condiciones

:

·         Longitud de onda: 562nm (en nuestro caso será 540nm que es la máxima que nos permite nuestro espectrofotómetro)

·         Volumen: 100

·         Temperatura: 0

·         Tiempo: 0

-Colocamos cada una de las cubetas en su orden (blanco, patrón ) para que el espectrofotómetro vaya absorbiendo.

-Anotamos las absorbancias que salgan.

Observaciones: 

El resultado que ha salido es muy bajo ya que la sangre utilizada lleva mucho tiempo en la nevera.

Resultados: 

Absorbancias:

·         Blanco RT = 0;

·         Patrón=0'059;

·         Blanco muestra= 1'503;

·         Muestra=1'507

Interpretación de los resultados: 

Los valores normales son:

·         Hombre entre 65 y 175 microgramos/dl

·         Mujeres entre 40 y 150 microgramos /dl.

Nuestro resultado es inferior a los valores normales, eso se puede deber a una anemia ferropénica o a un anemia de las afecciones crónicas. 

Hoja de trabajo

1. ¿Cuál es el reactivo cromógeno de esta técnica? El reactivo cromógeno es el R3 (FerroZine) que es el que da color.
2. ¿Porqué tenemos un tubo BR?.
3. ¿Qué muestras no son válidas? No son válidas las muestras lipémicas o hemolizadas.
4.  ¿En qué unidades se mide la sideremia? La sideremia se mide en microgramos por decilitro.